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多肽常用的幾種水解方法

雖然多肽合成的氨基酸組成分析方法較多,且趨向更靈敏、更精確、更簡便、更快速,但還沒有一種方法可以單獨適用于所有氨基酸殘基的檢測,并且很多因素如溫度、時間、水解試劑、水解方法及多肽合成樣品中添加劑等對水解程度均有影響。常用的水解方法作簡要介紹如下:

  1.酸性水解

  酸性水解是應用最為廣泛水解方法,可以使大多數氨基酸殘基完/全水解,最通用的水解劑是6 mol/L HCI。

  條件:6 mol/L HCI、真空、110℃.水解時間為20-24h。即可用于液相水解模式也可用于氣相水解模式。但在該條件下,天冬酰胺和谷氨酰胺分別被完/全水解為天冬氨酸和谷氨酸,色氨酸則被完/全破壞,半胱氨酸先用二硫代二丙/酸、4一乙/烯呲啶或碘代乙酸保護后水解方可測定,酷氨酸部分被水解液所破壞,絲氨酸和蘇氨酸被部分水解。有些脂肪族氨基酸殘基間的肽鍵難于裂解,可以通過延長水解時間如水解92h甚至120h來解決。

  2.堿性水解

  堿性水解一般選用NaOH和KOH作為水解劑。該水解方法是HCI水解的互補法。因為堿水解時,多數氨基酸遭到破壞或外消旋化,僅色氨酸是穩定的。所以此法僅/限于測定色氨酸。

  3.酶水解

  用一組蛋白酶水解肽鏈,特別適用于對化學水解敏感的氨基酸如天冬酰胺和谷氨酰胺的測定。水解過程中氨基酸不發生消旋化,幾乎可以保持所有的組成氨基酸不被破壞。但是因為酶水解條件溫和,對天冬酰胺、谷氨酰胺等皆無破壞作用,且反應需要較長的時間,水解不完/全,酶本身也是蛋白質,對樣品的測定結果可能會有干擾。

  微波輻射能水解,一般情況下190℃微波水解15分鐘肽類即可完/全水解,導致完/全水解的時間大大縮短。在微波輔助酸水解和微波輔助酶水解中,水解時間可從過去的幾十小時縮短到幾十分鐘。

  總之,多肽合成藥物水解方式應根據其產品的性質、研究目的、可獲得的樣品量及少實驗室的具體條件采取適宜的水解方法。

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